CRISPR
![]() |
Cascade (CRISPR相关病毒防御复合体) | |
---|---|
![]() | |
Structure of crRNA-guided E. coli Cascade complex (Cas, 蓝色) bound to single-stranded DNA (橘色). | |
标识 | |
生物 | |
符号 | CRISPR |
Entrez | 947229 |
PDB | 4QYZ |
RefSeq (蛋白质) | NP_417241.1 |
UniProt | P38036 |
其他数据 |
![](http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/5f/Crispr.png/500px-Crispr.png)
CRISPR(IPA:/ˈkrɪspər/;DJ:/ˈkrispə/;KK:/ˈkrɪspɚ/) 1987年日本科学家在大肠杆菌的基因组发现有特别的规律序列,某一小段DNA会一直重复,重复片段之间又有相等长的间隔,此序列称为 CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)。它是存在于细菌中的一种基因,该类基因组中含有曾经攻击过该细菌的病毒的基因片段。细菌透过这些基因片段来侦测并抵抗相同病毒的攻击,并摧毁其DNA。这类基因组是细菌免疫系统的关键组成部分。透过这些基因组,人类可以准确且有效地编辑生命体内的部分基因,也就是CRISPR/Cas9基因编辑技术。
CRISPR/Cas系统,为目前发现存在于多数细菌与绝大多数的古菌中的一种后天免疫系统[2],以消灭外来的质粒或者噬菌体[3][4],并在自身基因组中留下外来基因片段作为“记忆”[5]。台湾翻译全名为常间回文重复序列丛集/常间回文重复序列丛集关联蛋白系统,中国大陆则为规律间隔成簇短回文重复序列/规律间隔成簇短回文重复序列相关蛋白系统(或相关核酸酶系统)(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated proteins)。
目前已发现三种不同类型的 CRISPR/Cas系统,存在于大约40%和90%已定序的细菌和古菌中[6][7]。其中第二型的组成较为简单,以Cas9蛋白以及向导RNA(gRNA)为核心的组成。
Cas9是第一个被广泛应用的CRISPR核酸酶,其次是Cpf1,其在新泽西弗朗西斯菌的CRISPR/Cpf1系统中被发现[8][9]。其它这样的系统被认为存在[10]。
由于其对DNA干扰(DNAi)的特性(参见RNAi),目前被积极地应用于遗传工程中,作为基因体剪辑工具,与锌指核酸酶(ZFN)及类转录活化因子核酸酶(TALEN)同样利用非同源性末端接合(NHEJ)的机制,于基因体中产生DNA的双链断裂以利剪辑。第二型 CRISPR/Cas 经由遗传工程的改造应用于哺乳类细胞及斑马鱼的基因体剪辑[11][12]。其设计简单以及操作容易的特性为最大的优点,目前已逐步应用在各种不同的模式生物当中。
发现历史
[编辑]聚簇DNA重复的发现始于世界三个地区的三个独立地点。我们今天称为CRISPR的基因组重复群集,即原核生物拟核DNA链中的丛生重复序列,在1987年一份由大阪大学的石野良纯领衔的大肠杆菌研究报告中被首次描述[13]。2000年,相似的重复序列在其它真细菌和古细菌中被发现,并被命名为短间隔重复序列(Short Regularly Spaced Repeats,SRSR)[14]。2002年SRSR被重命名为CRISPR,其中一部分基因编码的蛋白为核酸酶和解旋酶,这些关联蛋白(Cas, CRISPR-associated proteins)与CRISPR组成了CRISPR/Cas系统[15]。
Cas9
[编辑]科学家还研究了来自化脓性链球菌的更简单的CRISPR系统,其依赖于蛋白Cas9。Cas9内切核酸酶是包含两个小RNA分子的四组分系统[16]。
詹妮弗·杜德纳、埃马纽埃尔·卡彭蒂耶及张锋各自独立的探索CRISPR关联蛋白,了解细菌如何在它们的免疫防御使用间隔(spacer)。他们共同研究一个比较简单的依赖于称为Cas9蛋白的CRISPR系统。
Cpf1
[编辑]在2015年,核酸酶Cpf1被发现在新泽西弗朗西斯菌的CRISPR/Cpf1系统[8][9]。其他这样的系统被认为存在[10]。Cpf1与Cas9的有几个关键差异,包括: 1. DNA 断裂方式不同:导致双链DNA中的“交错”或“黏性(sticky end)”切割,而不是由Cas9产生的“钝的 (Blunt end)”切割。 2. 相邻间隔原基序(PAM)不同:Cpf1辨认“富含T碱基”的PAM,而 Cas9 辨认 NGG 为PAM,可为 Cas9 提供替代的标靶序列。 3. 仅需要 CRISPR RNA(crRNA)用于成功标定(使用Cas9同时需要crRNA和一个反向活化crRNA(tracrRNA))。
Cas9n
Cas9n是SpCas9的D10A突变体,只保留了SpCas9两个核酸酶结构域(RuvC和HNH)中的一个来产生DNA切口而不是DSB。因此,需要两个靶向相反的Cas9n才能在靶DNA内产生DSB,这种方法大大提高了靶标特异性,因为不太可能产生两个离靶切口。
评价
[编辑]在2012年和2013年,CRISPR是《科学》年度突破的第二名。
在2014年和2016年被《麻省理工科技评论》评为10项突破技术之一[17][18]。
在2020年 艾曼纽尔.夏本提尔(Emmanuelle Charpentier) 与珍妮佛.道纳(Jennifer Doudna) 藉CRISPR的研究荣获2020年诺贝尔化学奖的桂冠
参考文献
[编辑]- ^ Horvath, Philippe; Barrangou, Rodolphe. CRISPR/Cas, the Immune System of Bacteria and Archaea. Science. 2010-01-08, 327 (5962): 167–170. ISSN 0036-8075. PMID 20056882. doi:10.1126/science.1179555 (英语).
- ^ Westra, Edze R.; Swarts, Daan C.; Staals, Raymond H.J.; Jore, Matthijs M.; Brouns, Stan J.J.; van der Oost, John. The CRISPRs, They Are A-Changin': How Prokaryotes Generate Adaptive Immunity. Annual Review of Genetics. 2012-12-15, 46 (1): 311–339 [2020-10-12]. ISSN 0066-4197. doi:10.1146/annurev-genet-110711-155447. (原始内容存档于2020-06-23) (英语).
- ^ Barrangou, R.; Fremaux, C.; Deveau, H.; Richards, M.; Boyaval, P.; Moineau, S.; Romero, D. A.; Horvath, P. CRISPR Provides Acquired Resistance Against Viruses in Prokaryotes. Science. 2007-03-23, 315 (5819): 1709–1712 [2020-10-12]. ISSN 0036-8075. PMID 17379808. doi:10.1126/science.1138140. (原始内容存档于2020-12-12) (英语).
- ^ Marraffini, Luciano A.; Sontheimer, Erik J. CRISPR Interference Limits Horizontal Gene Transfer in Staphylococci by Targeting DNA. Science. 2008-12-19, 322 (5909): 1843–1845. ISSN 0036-8075. PMC 2695655
. PMID 19095942. doi:10.1126/science.1165771 (英语).
- ^ Marraffini, Luciano A.; Sontheimer, Erik J. CRISPR interference: RNA-directed adaptive immunity in bacteria and archaea. Nature Reviews Genetics. 2010-03, 11 (3): 181–190 [2020-10-12]. ISSN 1471-0056. PMC 2928866
. PMID 20125085. doi:10.1038/nrg2749. (原始内容存档于2020-11-07) (英语).
- ^ 71/79 Archaea, 463/1008 Bacteria CRISPRdb (页面存档备份,存于互联网档案馆), Date: 19.6.2010
- ^ Grissa, Ibtissem; Vergnaud, Gilles; Pourcel, Christine. The CRISPRdb database and tools to display CRISPRs and to generate dictionaries of spacers and repeats. BMC Bioinformatics. 2007, 8 (1): 172 [2020-10-12]. PMC 1892036
. PMID 17521438. doi:10.1186/1471-2105-8-172. (原始内容存档于2020-10-28).
- ^ 8.0 8.1 Zetsche, Bernd; Gootenberg, Jonathan S.; Abudayyeh, Omar O.; Slaymaker, Ian M.; Makarova, Kira S.; Essletzbichler, Patrick; Volz, Sara E.; Joung, Julia; van der Oost, John. Cpf1 Is a Single RNA-Guided Endonuclease of a Class 2 CRISPR-Cas System. Cell. 2015-10, 163 (3): 759–771 [2020-10-12]. PMC 4638220
. PMID 26422227. doi:10.1016/j.cell.2015.09.038. (原始内容存档于2020-12-19) (英语).
- ^ 9.0 9.1 Fonfara, Ines; Richter, Hagen; Bratovič, Majda; Le Rhun, Anaïs; Charpentier, Emmanuelle. The CRISPR-associated DNA-cleaving enzyme Cpf1 also processes precursor CRISPR RNA. Nature. 2016-04, 532 (7600): 517–521 [2020-10-12]. ISSN 0028-0836. PMID 27096362. doi:10.1038/nature17945. (原始内容存档于2020-10-17) (英语).
- ^ 10.0 10.1 Even CRISPR. The Economist. 2015-10-03 [2020-10-12]. ISSN 0013-0613. (原始内容存档于2020-12-12).
- ^ Mali, Prashant; Yang, Luhan; Esvelt, Kevin M.; Aach, John; Guell, Marc; DiCarlo, James E.; Norville, Julie E.; Church, George M. RNA-Guided Human Genome Engineering via Cas9. Science. 2013-02-15, 339 (6121): 823–826 [2020-10-12]. ISSN 0036-8075. PMID 23287722. doi:10.1126/science.1232033. (原始内容存档于2020-12-12) (英语).
- ^ Hwang, Woong Y.; Fu, Yanfang; Reyon, Deepak; Maeder, Morgan L.; Tsai, Shengdar Q.; Sander, Jeffry D.; Peterson, Randall T.; Yeh, J.-R. Joanna; Joung, J. Keith. Efficient genome editing in zebrafish using a CRISPR-Cas system. Nature Biotechnology. 2013-03, 31 (3): 227–229 [2020-09-25]. ISSN 1546-1696. doi:10.1038/nbt.2501. (原始内容存档于2020-06-23) (英语).
- ^ Ishino, Y; Shinagawa, H; Makino, K; Amemura, M; Nakata, A. Nucleotide sequence of the iap gene, responsible for alkaline phosphatase isozyme conversion in Escherichia coli, and identification of the gene product.. Journal of Bacteriology. 1987, 169 (12): 5429–5433 [2020-10-12]. ISSN 0021-9193. PMC 213968
. PMID 3316184. doi:10.1128/JB.169.12.5429-5433.1987. (原始内容存档于2020-12-12) (英语).
- ^ Mojica, Francisco J. M.; Diez-Villasenor, Cesar; Soria, Elena; Juez, Guadalupe. Biological significance of a family of regularly spaced repeats in the genomes of Archaea, Bacteria and mitochondria. Molecular Microbiology. 2000-04, 36 (1): 244–246. ISSN 0950-382X. doi:10.1046/j.1365-2958.2000.01838.x (英语).
- ^ Jansen, Ruud.; Embden, Jan. D. A. van; Gaastra, Wim.; Schouls, Leo. M. Identification of genes that are associated with DNA repeats in prokaryotes. Molecular Microbiology. 2002-03, 43 (6): 1565–1575. ISSN 0950-382X. doi:10.1046/j.1365-2958.2002.02839.x (英语).
- ^ Barrangou, Rodolphe. Diversity of CRISPR-Cas immune systems and molecular machines. Genome Biology. 2015-12, 16 (1): 247 [2020-10-12]. ISSN 1474-760X. PMC 4638107
. PMID 26549499. doi:10.1186/s13059-015-0816-9. (原始内容存档于2020-12-12) (英语).
- ^ Talbot, David. Precise Gene Editing in Plants/ 10 Breakthrough Technologies 2016. Massachusetts Institute of Technology. 2016 [2016-03-18]. (原始内容存档于2020-04-09).
- ^ Larson, Christina; Schaffer, Amanda. Genome Editing/ 10 Breakthrough Technologies 2014. Massachusetts Institute of Technology. 2014 [2016-03-18]. (原始内容存档于2020-04-09).
延伸阅读
[编辑]- Doudna, Jennifer A; Mali, Prashant. CRISPR-Cas: a laboratory manual. 2016 [2020-10-12]. ISBN 978-1-62182-130-4. OCLC 922914104. (原始内容存档于2020-12-12) (英语).
- Mohanraju, Prarthana; Makarova, Kira S.; Zetsche, Bernd; Zhang, Feng; Koonin, Eugene V.; van der Oost, John. Diverse evolutionary roots and mechanistic variations of the CRISPR-Cas systems. Science. 2016-08-05, 353 (6299): aad5147. ISSN 0036-8075. doi:10.1126/science.aad5147 (英语).
- Sander, Jeffry D; Joung, J Keith. CRISPR-Cas systems for editing, regulating and targeting genomes. Nature Biotechnology. 2014-04, 32 (4): 347–355 [2020-10-12]. ISSN 1087-0156. PMC 4022601
. PMID 24584096. doi:10.1038/nbt.2842. (原始内容存档于2020-11-16) (英语).
- Slaymaker, I. M.; Gao, L.; Zetsche, B.; Scott, D. A.; Yan, W. X.; Zhang, F. Rationally engineered Cas9 nucleases with improved specificity. Science. 2016-01-01, 351 (6268): 84–88. Bibcode:2016Sci...351...84S. ISSN 0036-8075. PMC 4714946
. PMID 26628643. doi:10.1126/science.aad5227 (英语).
- Terns, Rebecca M.; Terns, Michael P. CRISPR-based technologies: prokaryotic defense weapons repurposed. Trends in Genetics. 2014-03, 30 (3): 111–118 [2020-10-12]. PMC 3981743
. PMID 24555991. doi:10.1016/j.tig.2014.01.003. (原始内容存档于2020-12-12) (英语).
- Westra, Edze R.; Buckling, Angus; Fineran, Peter C. CRISPR–Cas systems: beyond adaptive immunity. Nature Reviews Microbiology. 2014-05, 12 (5): 317–326 [2020-10-12]. ISSN 1740-1526. doi:10.1038/nrmicro3241. (原始内容存档于2020-08-07) (英语).
- Andersson, A. F.; Banfield, J. F. Virus Population Dynamics and Acquired Virus Resistance in Natural Microbial Communities. Science. 2008-05-23, 320 (5879): 1047–1050. Bibcode:2008Sci...320.1047A. ISSN 0036-8075. doi:10.1126/science.1157358 (英语).
- Hale, C.; Kleppe, K.; Terns, R. M.; Terns, M. P. Prokaryotic silencing (psi)RNAs in Pyrococcus furiosus. RNA. 2008-10-24, 14 (12): 2572–2579 [2020-10-12]. ISSN 1355-8382. PMC 2590957
. PMID 18971321. doi:10.1261/rna.1246808. (原始内容存档于2020-12-09) (英语).
- van der Ploeg, Jan R. Analysis of CRISPR in Streptococcus mutans suggests frequent occurrence of acquired immunity against infection by M102-like bacteriophages. Microbiology. 2009-06-01, 155 (6): 1966–1976 [2020-10-12]. ISSN 1350-0872. doi:10.1099/mic.0.027508-0. (原始内容存档于2020-12-12) (英语).
- van der Oost, John; Brouns, Stan J.J. RNAi: Prokaryotes Get in on the Act. Cell. 2009-11, 139 (5): 863–865 [2020-10-12]. PMID 19945373. doi:10.1016/j.cell.2009.11.018. (原始内容存档于2020-12-12) (英语).
- Karginov, Fedor V.; Hannon, Gregory J. The CRISPR System: Small RNA-Guided Defense in Bacteria and Archaea. Molecular Cell. 2010-01, 37 (1): 7–19 [2020-10-12]. PMC 2819186
. PMID 20129051. doi:10.1016/j.molcel.2009.12.033. (原始内容存档于2020-12-12) (英语).
- Pul, Ümit; Wurm, Reinhild; Arslan, Zihni; Geißen, René; Hofmann, Nina; Wagner, Rolf. Identification and characterization of E. coli CRISPR- cas promoters and their silencing by H-NS. Molecular Microbiology. 2010-03, 75 (6): 1495–1512. PMID 20132443. doi:10.1111/j.1365-2958.2010.07073.x (英语).
- Díez-Villaseñor, C.; Almendros, C.; García-Martínez, J.; Mojica, F. J. M. Diversity of CRISPR loci in Escherichia coli. Microbiology. 2010-05-01, 156 (5): 1351–1361 [2020-10-12]. ISSN 1350-0872. PMID 20133361. doi:10.1099/mic.0.036046-0. (原始内容存档于2020-12-12) (英语).
- Deveau, Hélène; Garneau, Josiane E.; Moineau, Sylvain. CRISPR/Cas System and Its Role in Phage-Bacteria Interactions. Annual Review of Microbiology. 2010-10-13, 64 (1): 475–493 [2020-10-12]. ISSN 0066-4227. PMID 20528693. doi:10.1146/annurev.micro.112408.134123. (原始内容存档于2020-01-06) (英语).
- Koonin, Eugene V; Makarova, Kira S. CRISPR-Cas: an adaptive immunity system in prokaryotes. F1000 Biology Reports. 2009-12-09, 1 [2020-10-12]. PMC 2884157
. PMID 20556198. doi:10.3410/B1-95. (原始内容存档于2020-12-12).
- The age of the red pen. The Economist. 2015-08-22 [2020-10-12]. ISSN 0013-0613. (原始内容存档于2020-12-12).
参阅
[编辑]- CRISPR/Cas基因编辑技术
- 基因编辑婴儿事件
- 基因剔除
- RNA干扰
- 小分子干扰核糖核酸(siRNA)
- 类转录活化因子核酸酶(TALEN)
- 锌指核酸酶(ZFN)
- 生物恐怖主义
- 生物武器
- 合成生物学