螢光原位雜交
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螢光原位雜合(fluorescent in situ hybridization,FISH) 是一種細胞遺傳學技術,可以用來對核酸進行檢測和定位。螢光標記的核酸探針只和具有高度相似性的核酸雜合,可用於染色體上基因的定位,或在分子生態學中用來標記不同分類細菌或古菌中的核糖體RNA。
在醫院的婦產科或相關檢驗所中,會利用螢光原位雜合技術來判別胎兒的染色體是否正常。
對於利用rRNA的螢光原位雜合來說,如下原因可導致較低的螢光信號強度:
- 較低的細胞核糖體含量
- 較低的細胞周邊的通透性
- 較低的目標序列可接觸性(由於rRNA的折疊產生的構象,有些位置與rRNA分子內其他鏈或其他rRNA或蛋白緊密接觸,從而使探針無法和目標序列雜合)
爲檢驗細胞中的目標序列是否容易被探針雜合,及測試最佳雜合溫度,可利用「克隆螢光原位雜合」(clone-FISH)進行試驗:將rRNA基因結合入質粒,轉化至大腸桿菌中表達,構成核糖體,再用螢光標記的探針雜合。
FISH可與流式細胞術聯用,對特定螢光標記的細胞進行計數或者分離。
變體
[編輯]- 酶聯螢光原位雜合(CARD-FISH)
延伸閱讀
[編輯]- Pernthaler A, Pernthaler J, Amann R. Fluorescence In Situ Hybridization and Catalyzed Reporter Deposition for the Identification of Marine Bacteria. Applied and Environmental Microbiology. 2002, 68 (6): 3094–3101. PMC 123953
. PMID 12039771. doi:10.1128/AEM.68.6.3094-3101.2002.
- Wagner M, Horn M, Daims H. Fluorescence in situ hybridisation for the identification and characterisation of prokaryotes. Current Opinion in Microbiology. 2003, 2003 (6): 302–309. doi:10.1016/S1369-5274(03)00054-7.
- Carthy, J.D. Viewpoints In Biology. England: Butterworth & Co. 1965: 66.
外部連結
[編輯]- 醫學主題詞表(MeSH):Fluorescence+in+Situ+Hybridization
- Information on fiber FISH from the Olympus Corporation
- A guide to fiber FISH (頁面存檔備份,存於網際網路檔案館) from Octavian Henegariu
- Fibre FISH protocol (頁面存檔備份,存於網際網路檔案館) from the Human Genome Project at the Sanger Centre
- CARD-FISH, BioMineWiki (頁面存檔備份,存於網際網路檔案館)
- Preparation of Complex DNA Probe Sets for 3D FISH with up to Six Different Fluorochromes (頁面存檔備份,存於網際網路檔案館)
- FISH technical notes and protocols from GeneDetect.com (頁面存檔備份,存於網際網路檔案館)
- Fluorescence in situ Hybridization Photos of bacteria (頁面存檔備份,存於網際網路檔案館)
- Rational design of polynucleotide probe mixes to identify particular genes in defined taxa: www.dnaBaser.com/PolyPro
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